Contenido
MODULO 1: Técnicas Bioquímicas
1. Modelos para estudios bioquímicos.
1.1 Planta, órgano, tejido, célula, organelo.
1.2 Modelos in vitro.
2. Observación directa.
2.1 Microscopía óptica.
2.2 Microscopía electrónica.
2.3 Microscopía confocal.
3. Métodos generales de laboratorio.
3.1 Medición de pH y conductividad.
3.2 Radiactividad.
3.3 Marcaje no radiactivo.
3.4 Autoradiografía.
3.5 Filtración con membranas y diálisis.
4. Separación e identificación de células, organelos y moléculas.
4.1 Cromatografía.
4.2 Electroforesis.
4.3 Centrifugación.
4.4 Métodos inmunológicos.
4.5 Citometría.
5. Métodos espectroscópicos.
5.1 De absorción.
5.2 De fluorescencia.
5.3 Dispersión óptica y dicroísmo circular.
5.4 Resonancia magnética nuclear.
5.5 Masas.
6. Medición de la actividad enzimática.
6.1 Concepto de enzima.
6.2 Métodos utilizados para medir actividad enzimática.
MODULO 2: Técnicas de Biología Molecular
1. Aislamiento de ácidos nucleicos de tejidos vegetales.
1.1 Métodos para el aislamiento de ADN, ARN total y poliadenilado.
1.2 Métodos para determinar la concentración, integridad y pureza de los ácidos nucleicos.
2. Tecnologías del ADN recombinante.
2.1 Clonación génica, plásmidos, enzimas de restricción, células competentes, selección de clonas recombinantes por alfa complementación, aislamiento de ADN plasmídico.
3. Métodos para medir la expresión génica.
3.1 Síntesis de bibliotecas de ADNc. Bibliotecas plasmídicas, bibliotecas fágicas, clonación por recombinación.
3.2 Métodos basados en hibridación directa. Southern y northern blot, métodos basados en la PCR, métodos combinados.
4. La reacción en cadena de la polimerasa (PCR).
4.1 Fundamentos de la PCR. Enzimas termoestables, diseño de oligonucleótidos cebadores, detección de secuencias específicas, clonación de secuencias completas.
4.2 PCR de punto final. Hot start PCR, clonación TA, clonación por topoisomerasas.
4.3 PCR en tiempo real. Formatos del PCR, métodos de cuantificación de productos, caracterización de productos por las curvas de fusión, uso de SYBR green, sondas TaqMan.
5. Transformación genética.
5.1 Métodos físicos y biológicos. Biobalística, fusión de protoplastos, microinyección, cocultivo con Agrobacterium tumefaciens y A. rhizogenes.
5.2 Vectores binarios. Promotores constitutivos e inducibles, genes reporteros y de selección.
6. Métodos para medir la interacción molecular.
6.1 Determinación de la interacción de proteínas con el ADN.
6.2 Inmunoprecipitación y coinmunoprecipitación.
6.3 Determinación de la interacción proteína-proteína.